中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆及抗菌、抗癌和溶血活性的测定

摘要

采用RT-PCR和3'RACE方法,从中国林蛙皮肤总RNA中克隆出了6条编码不同抗茵肽前体的cDNA序列,分别命名为:preprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb、preprotemporin-ICEc、preprobrevinin-ICEa、preprobrevinin-1CEb 和preprochensinin-1.cDNA碱基序列全长为289-315 bp,编码59～65个氨基酸.6个抗菌肽前体由3部分结构域组成:22个氨基酸残基组成的信号肽、多个酸性氨基酸残基组成的中间序列、高度变异的成熟肽.preprotemporin-1CEa、preprotemporin-1CEb和preprotemporin-1CEc属于temporin-1家族抗菌肽前体,具有肽链短,C-端酰胺化的特点;preprobrevinin-1CEb和preprobrevinin-1CEa属于brevinin-1家族抗菌肽前体,在肽链的C-端含有RANA盒结构,可在2个半胱氨酸残基间形成二硫键,组成7肽环;preprochensinin-1在已知多种数据库中没有发现序列同源的多肽,被鉴定为新抗菌肽.人工合成temporin-1CEa, temporin-1CEb、brevinin-1CEa和chensinin-1四种中国林蛙皮肤抗茵肽,活性检测结果表明:它们对金黄葡萄球菌等3种革兰氏阳性细菌的生长具有明显抑制作用,同时抑制乳腺癌MCF-7细胞和宫颈癌HeLa细胞生长.