裂褶菌F17锰过氧化物酶酶活力影响因素的响应面优化

摘要

锰过氧化物酶是真菌分泌的一种糖基化的含有血红素辅基的胞外蛋白,在染料降解和脱色过程中起着重要作用.本实验利用本实验室保存的的白腐真菌裂褶茵Schizophyllum sp.F17产锰过氧化物酶(MnP),研究MnP的酶学性质,并对酶活条件进行优化.实验通过超滤浓缩、DEAE-纤维素、DE52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤等步骤,分离纯化得到电泳纯的锰过氧化物酶.该酶蛋白含量为23μg/mL,分子量大小为49.2 kDa,在0.1 mmol/L H_2O_2中半衰期为5～6min.Mn~(2+)、H_2O_2以及酶的用量可以影响MnP酶促反应的效率,在单因子分析法的基础上,通过全因子中心组合设计响应面分析表明:H_2O_2以及H_2O_2与酶用量之间的交互作用对酶促反应的作用是最显著的.在优化条件下,酶对偶氮染料金橙G、刚果红显示出较强的脱色能力.