基因打靶定点突变秦川牛MSTN基因

摘要

Myostatin(MSTN,肌肉生长抑制素)基因属于TGF-β超家族,对骨骼肌的生长发育具有负调控作用.该基因的功能缺失,能够引起肉用动物的"双肌"表型,从而提高产肉率.基因打靶技术是制作转基因动物的常用方法.构建了两个置换型打靶载体pA2T-Mstn4.0和pA2T-Mstn3.2,通过同源重组将G938A突变点引入秦川牛MSTN基因第三外显子.电穿孔方法转染秦川牛胎儿成纤维细胞,经过600μg/mL G418和50 nmol/L GCV的药物正负筛选,共得到170个药物抗性细胞克隆.对细胞克隆进行PCR、测序及Southern blotting鉴定,结果显示,第58号细胞克隆为发生了正确同源重组的中靶细胞.牛胎儿成纤维细胞中的MSTN基因的一条等位基因被成功改造.