鱼类肌肉生长抑素MSTN基因克隆及其基因打靶载体构建

摘要

一种鱼类肌肉生长抑素MSTN基因及其基因打靶载体，它的方法是分离克隆了花鲈MSTN基因，其全长为4873bp，包括3个外显子，2个内含子，5’调控序列和非翻译区以及3’非翻译区。根据测定出的花鲈MSTN基因序列，设计引物，扩增得到该基因的一个3.2KB的长片段和一个1.5KB的短片段，将这两个片段依次连接到pBSII⁺KS载体上，获得重组载体p+MSTN3.2+MSTN1.5，然后将正选择标记基因neo片段连接到上述MSTN基因长片段和短片段的中间，形成p+MSTN3.2+MSTN1.5+neo的重组载体；最后将负选择标记基因SVTK-tk片段连接到上述长片段的侧翼，最后获得p+MSTN3.2+MSTN1.5+neo+tk的基因打靶载体。本发明克隆了鱼类MSTN全长基因，并首次构建了鱼类MSTN基因打靶载体，可用于各种鱼类MSTN基因克隆及基因打靶载体的构建，在鱼类基因工程育种上具有重要应用价值。