高浓度底物下青霉素扩环酶的活性评价与底物抑制现象

摘要

本文对青霉素扩环酶(Penicillin expandase,也称Deacetoxycephalosporin C synthase,DAOCS)在高浓度青霉素G下的底物抑制现象进行初步评价与表征,筛选适合工业应用条件的高活力突变体.我们通过HPLC对已报道的几个DAOCS高活力突变体在青霉素G浓度5.6至500 mmol/L间的比活力进行定量测定,并与不同催化反应动力学模型的理论推测变化趋势比较,发现DAOCS野生型酶及高活力突变体H4、H5、H6与H7在高浓度青霉素G条件下均表现出明显的底物抑制现象,但是变化趋势不同.野生型酶与突变体H4的比活力先上升后下降,与竞争性抑制模型预测不符.突变体H5、H6与H7的比活力变化呈现更复杂的变化趋势.在所有测试的突变体中,H6的活性显著高于其他突变体酶.青霉素G对野生型DAOCS的底物抑制现象符合非竞争性抑制模型的预测.而部分突变体表现出复杂的底物抑制行为,表明其具有更复杂的作用机制.在高底物浓度下筛选具有较强催化活性的青霉素扩环酶突变体对于推动其在工业生产中的应用具有重要指导作用.