大肠杆菌K12苹果酸酶的克隆、表达与纯化

摘要

以大肠杆菌K12基因组DNA为模板,PCR扩增得到NAD+依赖型苹果酸酶(NAD-ME)的全长基因,并克隆到载体pET24b(+)中,得到表达质粒pET24b-ME.在IPTG诱导下,携带pET24b-ME的大肠杆菌BL21(DE3)高效表达分子量约为65 kDa的可溶性蛋白.重组NAD-ME经镍亲和层析纯化,比活达到100U/mg以上.以上结果为深入研究苹果酸酶生物催化特性及其与辅酶的相互作用奠定了基础.