兔脂肪干细胞与软骨细胞微球共培养成软骨分化最适诱导比例的实验研究

摘要

通过间接共培养ADSC与软骨细胞微球,得出使ADSC发生软骨向分化的最佳比例.体外分离培养新西兰大白兔ADSC和软骨细胞,制成微球分置于Tranwell上下室,实验分为阳性对照组,阴性对照组,生长因子对照组及不同比例(0.5∶1;1∶1;1∶2;1∶3;1∶5;1∶7)的ADSC和软骨细胞共培养组,培养28天后分别行组织形态学观察,GAG、COL-Ⅱ和COL-X的定性定量检测.阿利新蓝-核固红染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色显示比例为0.5∶1和1∶1的阳性较弱,而X型胶原在生长因子对照组的表达最为强烈.DMMB法显示总GAG含量在共培养组较阴性对照组均有所增加(P＜0.05),且增加量与软骨细胞的比例呈正相关,但是在ADSC∶AC比例达到1∶5之后有所下降.OHP检测总胶原蛋白的变化同上,且1∶5组中沉积的胶原量比阴性对照组高出7.3倍.能够使ADSCs最大程度的表达软骨特异性细胞外基质,同时使COL-X等软骨肥大标志无明显上调的ADSC与软骨细胞的比例为1∶5,共培养诱导较生长因子能够抑制ADSC软骨向分化后的肥大问题.