含凝血酶识别位点的重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子…

摘要

采用ＰＣＲ技术，从细胞中获取粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子ｃＤＮＡ并在５′端设计上凝血酶酶切位点５个组氨基酸密码子，起始密码子及ＥｃｏＲ１酶切位点，在３′端设计上ＢａｍＨＩ酶切位点，将扩增产物酶切后克隆到ｐＢＶ２２０质粒的ＥｃｏＲＩ－ＢａｍＨＩ酶切位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α筛选阳性重组子（ｐＧＭ０９／ＤＨ５α）在Ｅ．ｃｏｌｉ中获高效表达，表达量占总蛋白３１．２％，生物活性为１．１×１０＾７Ｕ／Ｌ发酵