体外诱导人羊膜上皮细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

摘要

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力.方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定.取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培养基中诱导培养,分别于诱导不同时间采用免疫细胞化学法检测胰岛素和β2微球蛋白的表达,采用放射免疫法检测上清液中胰岛素含量,采用RT-PCR检测胰岛素mRNA和胰十二指肠同源异型盒因子-1(PDX-1 )mRNA的表达.结果:①hAEECs高表达CD29、CD73、CD166和CK19；②hAECs诱导组第7、14、21天胰岛素阳性细胞百分率分别为74.00％±1.73％、75.33％±1.15％和75.67％±0.58％,而对照组未见胰岛素阳性细胞；③hAECs诱导组第7、14、21天培养物上清液中胰岛素含量分别达(328.47±3.22) μIU/ml、(332.26±1.22) μIU/ml和(329.68±2.57)μIU/ml,均显著高于对照组(P均＜0.01)；④hAEGs诱导前后均有PDX-1 mRNA和β2微球蛋白表达,胰岛素mRNA表达仅见于诱导组.结论:hAECs能分化为ISCs,在Ⅰ型糖尿病细胞移植治疗方面具有潜在应用前景.