体外诱导人羊膜上皮细胞分化为结膜上皮样细胞的实验研究

摘要

目的:建立体外培养人羊膜上皮细胞(HAECs)和兔结膜上皮细胞的方法,通过将两种细胞共培养,观察并检测是否能将人羊膜上皮细胞诱导分化为结膜上皮样细胞。
　　方法:①分别采用酶消化法和组织块法获得HAECs和兔结膜上皮细胞,并对培养的细胞进行形态学观察;②将HAECs和兔结膜上皮细胞在Transwell非接触共培养系统中共培养10天,以诱导HAECs分化;③通过倒置显微镜和原子力显微镜对诱导前后的HAECs进行形态学及超微结构比较,对诱导前后的HAECs进行PAS染色、HE染色,免疫荧光法检测诱导前后HAECs中CK4、MUC4、MUC5AC的表达,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测分化细胞MUC4、MUC5ACmRNA的表达。
　　结果:共培养后的人羊膜上皮细胞和兔结膜上皮细胞形态较为相似,诱导后的HAECs中可见少量 PAS阳性细胞,细胞免疫荧光法检测到诱导后HAECs中 CK4、MUC4、MUC5AC呈阳性表达,qRT-PCR检测到分化后细胞MUC4、MUC5AC mRNA表达水平较诱导前上调。
　　结论:HAECs在与兔结膜上皮细胞共培养诱导条件下,可以向结膜上皮样细胞和杯状细胞转分化。

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前言

1. 结膜的组织结构和功能

2. 结膜重建的主要治疗方法

3. 组织工程结膜的研究进展

4.人羊膜上皮细胞的干细胞特性及其在结膜重建的应用前景

第一部分 人羊膜上皮细胞和兔结膜上皮细胞的体外培养及鉴定

材料与方法

结果

讨论

第二部分 诱导人羊膜上皮细胞向结膜上皮样细胞转分化及鉴定

材料与方法

结果

讨论

全文结论

一、主要研究结果

二、问题与展望

参考文献

附图

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致谢