Nephrin和Podocin的细胞内共定位及相互作用

摘要

目的 研究肾小球裂孔隔膜分子Nephrin和Podoein的细胞内表达及相互作用.方法 构建载有Nephrin和Podocin羧基端的质粒载体,双重转染的COS-7细胞,采用双免疫荧光标记后经共聚焦显微镜观察Nephrin和Podocin的细胞内分布情况;构建载有谷胱甘肽S-转移酶(GST)-Nephrin,-Podocin的质粒载体转化至感受态细菌后提取融合蛋白,应用免疫共沉淀及GST pull-down分析研究体外培养的COS-7细胞内和大鼠肾小球细胞内Nephrin和Podocin蛋白间的相互作用.结果 Nephrin和Podoein在体外培养的COS-7细胞内共存,二者共存于细胞质的囊泡样结构内,尤其在细胞膜上重合为线样结构;体内和体外实验结果均表明二者存在相互作用,具体的作用部位为细胞内段的羧基端,Nephrin 1 134～1 241氨基酸区域与Podoein 262～383氨基酸区域存在相互作用.结论 裂孔隔膜分子Nephfin和Podocin具有体内、体外的物理作用,可能与维持裂孔隔膜的功能和结构稳定性有关.