荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法检测MTB耐药性的临床应用比较

摘要

目的 分析荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法药物敏感性试验(简称"药敏试验")检测结核分枝杆菌(MTB)对抗结核药品耐药性结果的一致性及MTB基因突变与耐药的相关性,为临床诊疗优化提供参考.方法 搜集2019年1 -12月分离自西安市胸科医院就诊患者并经鉴定确认的343株MTB临床分离株,菌株均进行了微孔板法药敏试验和荧光PCR探针熔解曲线法检测.以微孔板法药敏试验结果为参照,评价荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、莫西沙星和左氧氟沙星耐药性的检测效能,并分析荧光PCR探针熔解曲线法检测的MTB基因突变与微孔板法药敏试验最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentra-tion,MIC)的相关性.结果 以微孔板法药敏试验结果为参照,荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、莫西沙星和左氧氟沙星耐药性的敏感度、特异度、Kappa值分别为:96.20％ (76/79)、95.28％(242/254)、0.88;93.62％(44/47)、94.58％ (279/295)、0.79;96.88％ (62/64)、94.96％ (264/278)、0.86;93.33％(14/15)、95.37％ (309/324)、0.61;92.31％ (24/26)、97.16％ (308/317)、0.80;91.18％ (31/34)、99.35％(307/309)、0.92.荧光PCR探针熔解曲线法检测结果与微孔板法表型药敏试验检测结果不一致的菌株中,发生异烟肼AhpC启动子区(-44?-30及-15?3位点),利福平rpoB基因507～512位点,链霉素rrs基因905?908位点多位点突变和乙胺丁醇embB基因406位点突变的菌株,表型药敏试验耐药率较低,分别为1/5、1/5、1/10和1/5;而发生异烟肼KatG基因315位点、利福平rpoB基因529?533位点、链霉素rpsL基因43位点突变的菌株,表型药敏试验耐药率较高,分别为92.42％(61/66)、92.31％(36/39)和95.74％(45/47).结论 荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法药敏试验检测MTB对抗结核药品耐药性结果具有较好的一致性;MTB对异烟肼、利福平、链霉素的耐药与其部分基因突变具有一定相关性.