中试生产的结核DNA疫苗免疫效能研究

摘要

目的 以300L发酵罐中试规模生产的冻干Mtb Ag85A质粒DNA疫苗为基础免疫小鼠,对该疫苗的免疫效能进行研究.方法 将4～6周龄的BALB/c小鼠20只通过数字表法随机分为2组,一组免疫MtbAg85A质粒DNA疫苗(结核DNA疫苗免疫组),另一组免疫PBS作为阴性对照(PBS对照组)；于免疫前采血,肌内注射免疫3次.在第3次免疫后3周摘眼球处死小鼠,收集血清,进行血清特异性抗体检测和细胞因子(IFN-γ、IL-4)检测；同时对每只小鼠取脾细胞进行特异性γ干扰素(IFN-γ)分泌检测和脾细胞CD4+、CD8+百分率检测.结果 (1)免疫前后免疫组与对照组抗体水平吸光度A值均小于0.2.(2)结核DNA疫苗免疫组血清细胞因子IL-4水平[(146.2±34.3) pg/ml]低于PBS对照组[(177.7±28.1)pg/ml],差异有统计学意义(t=2.244,P=0.038),而IFN-γ水平[(129.6±159.0) pg/ml]虽然高于PBS对照组[(76.5±21.5) pg/ml],但差异无统计学意义(t=-1.047,P=0.309).(3)酶联免疫斑点检测结果表明结核DNA疫苗免疫组脾细胞特异性IFN-γ分泌水平(分泌IFN-γ细胞个数)(103.60±112.14)高于PBS对照组(5.78±5.83),差异有统计学意义(t=36.538,P=0.018).(4)结核DNA疫苗免疫组CD4+细胞百分率均值(21.57％)高于PBS对照组(12.17％),差异有统计学意义(t=3.043,P=0.038)；CD8+细胞百分率均值(13.70％)与PBS对照组(10.57％)相比,差异无统计学意义(t=0.847,P=0.445).结论 Mtb Ag85A质粒DNA疫苗主要刺激机体Th1型细胞免疫,而对诱导机体产生Th2型细胞免疫应答没有显著的促进作用.