小鼠皮肤成纤维细胞的体细胞核移植

摘要

取成年小鼠唇部皮肤进行培养, 分离成纤维细胞并血清饥饿培养1周, 用作核供体.对成年小鼠进行超排, 取卵母细胞用作核受体,核移植重构胚经SrCl2激活处理6 h后, 同mM16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养, 把发育到早期囊胚的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上, 添加ES细胞条件培养液,消化分离ICM, 然后接种培养, 对孵出的ES细胞样集落进行鉴定培养.结果显示, 小鼠唇部皮肤成纤维细胞为核供体, 核移植重构胚2-细胞率为54.05%, 桑椹胚率17.14%, 囊胚率6.90 %, 对照组卵丘细胞的核移植重构胚2-细胞率为60.00%, 桑椹胚率21.85%, 囊胚率11.69 %, 但2种供体细胞在支持核移植重构胚发育能力上差异不显著.成纤维细胞重构囊胚中6个囊胚分离出ES细胞样集落, 3个ES细胞样集落可稳定传代; 对照组卵丘细胞重构囊胚中9个囊胚中分离出ES细胞样集落, 5个ES细胞样集落可稳定传代.从核移植重构胚中分离出的ES细胞样集落具有岛状或巢状群体生长形态,生长旺盛的集落可自发分化成单个散在或片状存在的上皮样或梭形细胞, 碱性磷酸酶检测为阳性, 常规冻存复苏, 仍显示ES细胞特征.