不同培养方法对鸡精原干细胞体外培养效果的影响

摘要

本研究从孵化至16 d的鸡胚睾丸中分离获取精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs),比较3种培养液、2种处理(有无饲养层)对SSCs生长的影响,并对SSCs保持特性进行鉴定.结果表明:在无饲养层细胞存在的条件下,DMEM、TCM199和RPMI1640培养液中,SSCs的存活时间分别为6.5 、6.0 和3.5 d,DMEM 和TCM199培养液之间差异不显著(P>0.05),但两者与RPMI1640之间均存在极显著差异(P<0.01).在有饲养层细胞存在的条件下,在DMEM、TCM199和RPMI1640培养液中,SSCs的存活时间分别为45.5、38.0 和14.0 d,三者相互之间存在着极显著的差异(P<0.01).在6种培养体系中,SSCs在培养体系Ⅳ中的存活时间和AKP阳性克隆率分别为(45.5±3.20)d和0.31±0.46,极显著地高于其他5种培养体系(P<0.01).SSCs在培养体系Ⅳ中传代至1、2和3代时,AKP阳性克隆率分别为31.6%、20%和18%.SSCs形成的克隆,经AKP活性检测和SSEA-1免疫染色,均呈阳性.传代至第3代的SSCs,其染色体组型保持不变,为2n=78.这些结果表明,SSCs在以DMEM为基础培养基的培养体系Ⅳ中培养至第3代时,仍保持干细胞未分化特性.