水牛BMP1基因对颗粒细胞增殖与凋亡的功能研究

摘要

本研究旨在探讨BMP1基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖与凋亡的影响,采用qRT-PCR检测体外培养o、24、48、72和96 h水牛颗粒细胞中BMP1基因的表达规律,通过在水牛颗粒细胞培养液中添加BMP1基因重组蛋白和抗BMP1抗体,观察其对体外培养水牛颗粒细胞增殖变化的影响,并应用qRT-PCR和Western blotting方法检测与细胞增殖和细胞凋亡相关因子表达的变化规律.结果显示,随着颗粒细胞体外培养时间的延长,BMP1基因的相对表达量显著上调(P＜0.05),96 h培养组BMP1表达最高.添加BMP1重组蛋白可显著促进水牛颗粒细胞的体外增殖(P＜0.05),并能够显著上调细胞周期关键蛋白Cyclin D1、Cyclin D2和PCNA mRNA表达水平(P＜0.05),同时显著抑制了细胞凋亡信号通路中促凋亡相关因子(Fas、FasL、TNFR1、TNF-a、Cytochrome C、Apaf1、Chop 、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9)mRNA表达(P＜0.05).Western blotting检测结果表明,BMP1重组蛋白能够抑制Fas、Bax和Caspase-9蛋白表达,蛋白与mRNA表达一致.而添加抗BMP1抗体的试验则得出相反的结果.综上表明,BMP1基因能通过调控相关基因的表达促进体外培养水牛颗粒细胞的增殖并抑制其凋亡,在水牛卵泡发生过程中具有重要的调控功能,为阐明BMP1基因参与家畜卵泡发生的分子机制奠定基础.