产植酸酶黑曲霉菌株S8的基因扩增与鉴定

摘要

本文主要报道了用3种不同方法从S8黑曲霉菌丝体中提取基因组DNA,最适方法是经改进的Vitagene试剂盒法.PCR扩增效果最好的是设计时没有去掉phyA基因内含子的引物,获得的特异性PCR产物长约1.5kb.同时对PCR反应体系进行了优化.对扩增出的目的片段用3种不同方法进行纯化回收,结果是PCR Fragment Recovery Kit法回收效果最好,其产量可达到约10 ng/μL.根据已报道的植酸酶phyA基因序列酶切位点,对回收的目的片段进行酶切鉴定,该基因能被BamHⅠ、SalⅠ酶切,不能被Hind Ⅲ、Xbal Ⅰ、KPn Ⅰ酶切,与已知的phyA基因酶切图谱基本一致,进一步判定PCR扩增产物中含有植酸酶phyA基因目的片段.