血根碱通过核转录因子-κB信号通路减轻脂多糖诱导的仔猪小肠黏膜上皮细胞炎症反应

摘要

本试验旨在研究血根碱( SG)通过核转录因子-κB( NF-κB)信号通路调控仔猪小肠黏膜上皮细胞( IPEC-J2细胞)抗炎作用机制.在探明SG对IPEC-J2细胞促生长作用的适宜浓度和时间以及构建 IPEC-J2 细胞致炎模型的 LPS 适宜浓度和时间的基础上,检测对照组(无添加) 、致炎模型细胞组( LPS组,5.0 μg/mL LPS处理1 h)和适宜浓度SG+LPS致炎模型细胞组(SG+LPS组,5.0 μg/mL LPS处理1 h和0.500 μg/mL SG处理24 h)细胞中NF-κB信号通路相关基因和蛋白表达及其产物含量.结果表明:1) SG对IPEC-J2细胞促生长作用的适宜浓度和时间分别为0.500 μg/mL和24 h,构建IPEC-J2细胞致炎模型LPS的适宜浓度和时间分别为5.0 μg/mL和1 h. 2)与对照组相比,LPS组白细胞介素-6( IL-6) 、白细胞介素-8( IL-8)、核转录因子-κB 亚基 1 ( NF-κB1A ) 、核转录因子-κB2 ( NF-κB2 ) 、肿瘤坏死因子-α 诱导蛋白 3 ( TNFAIP3) 、核转录因子κB激酶抑制剂ε( IKKε) 、核转录因子-κB1( NF-κB1) 、RelB mRNA相对表达量均极显著升高( P＜0.01) ;细胞上清液中IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α( TNF-α)含量显著或极显著升高( P＜0. 05或P＜0.01) ;细胞总蛋白中核转录因子-κB抑制蛋白α( IκBα) 、p65蛋白表达量极显著降低( P＜0.01) ,核蛋白中p65蛋白表达量极显著升高( P＜0.01) ,胞浆蛋白中p65 蛋白表达量极显著下降( P＜0. 01 ) . 3 )与 LPS 组相比, SG+LPS 组细胞中 IL-6、 IL-8、NF-кB1A、NF-кB2、TNFAIP3、IKKε、NF-кB1 mRNA 相对表达量显著或极显著降低( P＜0. 05 或P＜0.01);细胞上清液中IL-6和IL-8含量显著或极显著降低( P＜0.05或P＜0.01) ;细胞总蛋白中IκBα蛋白表达量极显著升高(P＜0.01) ,核蛋白中p65蛋白表达量极显著下降( P＜0.01) ,胞浆蛋白中p65蛋白表达量极显著升高( P＜0.01) .由此可见,SG通过抑制NF-κB信号通路相关基因的活化和p65核转移,减轻IPEC-J2细胞的炎症反应.