应用RT-PCR方法检测牛消化道各段Ⅰ型肽载体mRNA差异表达的研究

摘要

已有的研究表明,消化道可以小肽的形式吸收氨基酸,但尚未很好地确定小肽的主要吸收部位.我们在另一项研究中对牛I型肽载体(BPepT I)第3～10结构域1 566 bp片段序列进行了测定(Gcncbank登录号:DQ309694),与绵羊相同区域片段序列同源性高达96.04%.本研究以Bpep I测序结果为基础,并参考绵羊的部分序列设计了跨内含子引物,荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定了牛离体各段消化道黏膜或上皮组织脚BPepT I的相对表达水平,以评估小肽在牛消化道的主要吸收部位.以持家基因β-actin为参比基因,结肠样品为校正样品(其相对表达量2-△△c＞T值为1),研究结果表明:在整段消化道中,BPepT I的相对表达量(2-△△c＞T值)由高到低依次为回肠(30.62)、空肠(26.12)、瓣胃(22.61)、瘤胃(16.17)、十二指肠(11.97)、网胃(5.18)、皱胃(3.22)、盲肠(1.13)和结肠(1.00).各段消化道BPepT I相对表达量差异显著(P＜0.05),其中回肠相对表达量与空肠和瓣胃差异不显著(P＞0.05),与瘤胃、十二指肠、网胃、皱胃、盲肠、结肠差异显著(P＜0.05);空肠相对表达量与瓣胃、瘤胃、十二指肠差异不显著(P＞0.05),与网胃、皱胃、盲肠、结肠差异显著(P＜0.05);网胃,皱胃、盲肠、结肠的2-△△c＞T 值均在5.2以下,相互之间相对表达量的差异不显著(P＞0.05).由BPepT I基因相对表达活性可以将牛的各段消化道分为3组,回肠、空肠、瓣胃的活性最高,其次为瘤胃和十二指肠,网胃、皱胃、盲肠、结肠则;.