表没食子儿茶素没食子酸酯对大肠杆菌诱导型奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的影响

摘要

本试验旨在研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过核因子-κB(NF-κB)通路对大肠杆菌诱导型奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的影响。试验选用原代奶牛乳腺上皮细胞(pbMEC)为研究对象,分别用不同浓度的EGCG[0(对照)、20、40、60、80和100μmol/mL]培养12 h,测定细胞活力,确定以60μmol/mL的EGCG进行后续试验。将培养好的细胞分为3个组,分别为对照组、大肠杆菌处理组(1×10^(7))CFU大肠杆菌处理细胞6 h)和EGCG+大肠杆菌处理组(先用60μg/mL EGCG处理细胞24 h,再用1×10~7CFU大肠杆菌处理细胞6 h),每组设3个重复。结果表明:1)EGCG对大肠杆菌抑制的细胞增殖有一定的保护作用。2)EGCG显著降低了大肠杆菌诱导的pbMEC中丙二醛生成量的升高(P<0.05),明显降低了大肠杆菌诱导的pbMEC中活性氧含量的升高。3)EGCG显著降低了大肠杆菌诱导的pbMEC中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和Toll样受体4(TLR4)mRNA相对表达量的升高(P<0.05),显著降低了大肠杆菌诱导的pbMEC中TLR4、磷酸化p65(p-p65)和髓样分化因子88(MyD88)蛋白表达量的升高(P<0.05),并且明显降低了p-p65在大肠杆菌诱导的pbMEC中胞质和胞核中的表达。结果提示,EGCG能够抑制大肠杆菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症因子以及NF-κB通路相关蛋白的表达,对乳腺上皮细胞炎症反应以及氧化应激具有一定的缓解作用。