大片吸虫成虫cDNA文库的构建和组织蛋白酶L1基因的克隆

摘要

目的 大片吸虫cDNA文库的构建及组织蛋白酶L1(Fasciola gigantica Cathepsin L1,FgCL1)基因的克隆.方法 提取大片吸虫成虫总RNA,运用SMART技术构建大片吸虫cDNA文库.根据文献设计并合成PCR引物,从上述文库中克隆大片吸虫FgCL1基因,定向克隆至原核表达载体pET28a中.结果 文库容量为2.08×106pfu/mL,重组率为98%.扩增后的文库滴度为6.23×109 pfu/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp.应用两个已知基因(FgCL1 FgGST)从文库中成功钓取到相应的全长基因.将含有FgCL1的阳性克隆测序,用Genebank Blast进行序列比较,证实为FgCL1基因.结论 成功构建了cDNA文库,提供筛选大片吸虫基因资源;从该文库中克隆出FgCL1,为进一步表达该基因,研制诊断试剂盒创造了条件.