肝片吸虫组织蛋白酶L1基因cDNA序列的克隆与分析

摘要

目的　研制肝片吸虫的候选DNA疫苗。　方法　根据国际发表的相关序列设计引物 ,在引物端加酶切位点 ,应用RT PCR方法。　结果　成功地将肝片吸虫组织蛋白酶L1(FheCL1)基因cDNA序列克隆进真核表达载体 pcD NA3 .1中。对所克隆的FheCL1基因序列及其推导的氨基酸序列进行分析 ,发现其与已发表序列相比 ,核苷酸序列有4.3 %的差异 ;推导的氨基酸序列有 6.9%的差异。两者蛋白质二级结构主要有 3个区域的区别 ,磷酸化位点有 10个不同 ,但共有一由 2 0个疏水氨基酸残基组成的保守区域。　结论　实验构建的 pcDNA3 .1 FheCL1重组质粒是一种新型的抗肝片吸虫DNA疫苗候选重组质粒 ;肝片吸虫可能存在不同的亚种 ,两者的FheCL1基因编码的第 1～ 2 0个氨基酸残基可能组成膜螺旋。