利用正交设计优化羊食道口线虫SRAP-PCR反应体系

摘要

In order to know the genetic diversity of Oesophagostomum of goat using SRAP-PCR, four factors, including DNA polymerase, Mg2+, dNTPs and primers in SRAP-PCR system were optimized using orthogonal design. The result should 25μL optimized SRAP-PCR system contains 2.5μL 10×PCR buffer, 20 ng DNA template, 3μL 25 mmol/L Mg2+, 3μL 2.5 mmol/L dNTPs, 4μL 10 pmol/μL primers, 0.2 μL rTaq DNA polymerase (5U/μL) and dd H2O. The results built a base for the study of genetic evolution of Oesophagostomum using SRAP technology.%本研究利用正交设计L16（4）对羊食道口线虫SRAP-PCR反应体系的4因素：Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物进行摸索。结果表明：各因素的不同水平对SRAP-PCR反应结果都有显著的影响，正交设计组合4中扩增的条带最清晰；羊食道口线虫SRAP-PCR最佳反应条件：最佳引物给合为Me1/Em7，最佳反应体系为25μL：2.5μL 10×PCR buffer、20 ng模板DNA、Mg2+（25 mmol/L）3μL、dNTPs （2.5 mmol/L/μL）3μL、引物（10 pmol/μL）4μL、rTaq DNA聚合酶（5U/μL）0.2μL、灭菌ddH20补足。本研究结果为进一步采用SRAP技术来研究食道口线虫遗传进化奠定了坚实基础。