正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

摘要

本研究以假俭草叶片DNA为模板，采用正交试验设计，以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶四种因素三个水平，对假俭草SRAP反应体系进行研究，并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响，建立了假俭草的SRAP最佳反应体系。结果表明，假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为：2μl 10×PCR buffer、60ng模板DNA、Mg2+.50mmol1·L-1、dNTP260μmol-L-1、引物O.25μmol·L-1、TaqDNA聚合酶0.5U，总体积为20~tl。各因素对扩增反应结果均有不同影响，其中以Mg2+浓度影响最大，Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证，证明该体系稳定可靠，并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰，多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性弓}物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学的依据。