致病性副溶血弧菌三重PCR检测方法的建立和评价

摘要

根据副溶血弧菌种特异性基因(toxR)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法.3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段.副溶血弧菌均能扩增出toxR基因,不合溶血素基因的菌株(tdh-/trh)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+ /trh+)特异性条带.检测其他非副溶血弧菌的供试茵,则不出现任何扩增条带人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/mL.结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义.