高糖诱发施万细胞损伤时自噬与Nrf2信号通路的关系

摘要

目的探讨高糖诱发施万细胞损伤时自噬与核因子E2相关受体2（Nrf2）信号通路的关系。方法将原代细胞株RSC96体外培养制成单细胞原液,分别接种于96孔板（1×104个/ml,200 μl/孔）或6孔板（1×106个/ml,2 ml/孔）,培养48 h。采用随机数字表法分为3组（n=25）:对照组（C组）、高糖组（H组）和高糖+自噬激动剂雷帕霉素组（H+RAP组）。C组在正常培养基中培养;H组培养基中加入50 mmol/L葡萄糖;H+RAP组培养基中加入50 mmol/L葡萄糖和5 μmol/L雷帕霉素。孵育48 h时,倒置显微镜下观察细胞生长情况,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,Western blot法检测Nrf2、P62和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）的表达水平。结果与C组比较,H组和H+RAP组细胞活力和SOD活性降低,细胞凋亡率和MDA含量升高,Nrf2、P62和LC3Ⅱ表达上调（P＆0.05）;与H组比较,H+RAP组细胞活力和SOD活性升高,细胞凋亡率和MDA含量降低,Nrf2和LC3Ⅱ表达上调,P62表达下调（P＆0.05）。结论自噬水平增强可激活Nrf2信号通路,是高糖诱发施万细胞损伤的内源性保护机制。