恶性高热实验室诊断方法的初步建立

摘要

目的初步建立恶性高热（MH）的实验室诊断方法—咖啡因-氟烷骨骼肌收缩试验（CHCT）。方法选取10头实验小型猪和1头皮特兰猪,肌肉注射氯胺酮和地西泮麻醉后,静脉注射硫喷妥钠5 mg/kg和琥珀胆碱2 mg/kg麻醉诱导后气管插管,机械通气,吸入2%～3%氟烷4h,新鲜气流量为2 L/min,纯氧和空气各1 L/min。记录麻醉过程中及麻醉结束后48 h内MH的发生情况。气管插管后即刻取耳组织,采用常规酚氯仿方法提取基因组DNA,检测蓝尼定受体-1（RYR1）基因的突变情况。根据北美MH研究组的标准建立CHCT的实验装置,气管插管后即刻取股四头肌近肌腱部位的肌纤维,进行CHCT。结果实验小型猪均未见MH发作,而皮特兰猪在麻醉过程中出现MH的特征性表现。RYR1基因检测显示,实验小型猪均为氟烷抗性基因型（HALNN）;皮特兰猪为氟烷易感基因型（HALnn）。CHCT结果表明,实验小型猪诊断为非MH易感猪,皮特兰猪诊断为MH易感猪。结论实验小型猪和皮特兰猪的CHCT诊断结果与特征性表现及RYR1基因检测结果均一致,初步验证本实验室CHCT设备的稳定性及测定结果的可靠性。