鸡精原干细胞分离培养的影响因素

摘要

目的:比较不同分离方法和培养体系对鸡精原干细胞(SSCs)生长的影响.方法:采用3种分离方法、6种培养体系对SSCs进行分离培养.结果:胶原酶+胰蛋白酶组合消化睾丸后获得的平均活细胞率显著地高于其余两种方法.在有和无饲养层细胞存在的条件下,SSCs在DMEM培养液中存活的时间分别为6.5 d和45.5 d,显著地长于在TCM199和RRMI1640中.在6种培养体系中,SSCs在有饲养层体系Ⅳ中存活时间和碱性磷酸酶(AKP)阳性克隆率分别为(45.5±3.2)d和31%±16%,显著地高于其他5种培养体系.SSCs在有饲养层体系Ⅳ中传代传至1、2和3代时,AKP阳性克隆率分别为31.6%、20%和18%.SSCs形成的克隆,经SSEA-1免疫染色,均为阳性.传代至第3代的SSCs,其染色体组型保持不变.结论:采用二酶组合法分离获取SSCs,而以DMEM为基础液形成的有饲养层体系Ⅳ较为适宜.