顺序注射可更新表面固相荧光免疫法测定人血清中免疫球蛋白G

摘要

建立了采用芯片式微型流通池的测定人血清中免疫球蛋白G(IgG)的顺序注射可更新表面非均相荧光免疫分析法.将羊抗人IgG抗体固定于包被有蛋白A的Sepharose CL-4B凝胶微珠,然后制备成固相抗体.用标记FITC的抗人IgG抗体作为第二抗体.固相抗体、血清试样和荧光标记第二抗体由顺序注射系统注入芯片式微型流通池,并在其中进行免疫反应生成夹心式抗体-抗原荧光复合物.荧光分光光度计通过光纤与流通池耦合测定截留于流通池中的抗体-抗原复合物荧光强度.一次测定完成后,微珠即被排出流通池.流通池经缓冲液清洗后即可进行下一次测定.体系经优化后,检出限为0.1 mg/L IgG,分析速率达到11次/h.3.9 mg/L IgG的日内和日间精密度(RSD)分别为1.7% 和5.2%;校正曲线的线性范围为0.3～7.0 mg/L IgG.所建立的方法已成功地应用于人血清中IgG的测定.