顺序注射可更新表面固相荧光分析系统的研究及应用

摘要

论文由三部分组成.第一章对顺序注射可更新表面技术的发展现状进行了综述.介绍了该技术的原理、特点、发展历史及其在免疫分析、细胞功能检测、酶反应检测等领域的应用.第二章建立了顺序注射可更新表面固相荧光分析系统.此系统由顺序注射仪、自制的芯片式流通池和商品荧光仪组成.顺序注射系统与芯片式流通池偶联用于试样的在线化学反应、微珠的引入和排放、及试样在微珠上的吸附.自制的芯片式流通池用于截留C18微珠,微珠表面可吸附疏水的荧光物质.芯片式流通池与商品荧光仪通过一根多股双岔光纤偶联用于原位固相荧光的检测.该研究将顺序注射可更新表面固相荧光分析系统应用于药物制剂中维生素B<,1>的测定.在碱性环境中,维生素B<,1>在线被铁氰化钾氧化,产物硫色素被截留在芯片式流通池中的C18微珠吸附富集并原位检测,荧光的激发波长和发射波长分别为385nm和433nm.方法的检测限为0.03μg/ml,分析速度为30次/小时,C18微珠的消耗量为1.0mg/次,2μg/ml 维生素B<,1>连续进样11次得到的相对标准偏差为1.0﹪.该法测定维生素B<,1>片剂、复方维生素B片剂和复方维生素B糖浆中的维生素B<,1>含量,与药典规定的标准方法的测定结果一致.第三章将顺序注射可更新表面固相荧光分析系统用于人体血清中免疫球蛋白G(IgG)的检测.该法根据非均相夹心式免疫分析原理,采用包被蛋白质A的Sepharose CL-4B凝胶微珠为固相载体,结合羊抗人IgG抗体作为固相抗体,以异硫氰酸酯荧光素(FITC)标记第二抗体作为荧光检测探针.首先,将固相抗体注入芯片式流通池,固相抗体被截留;其次,注入人IgG试样,IgG与固相抗体结合;再次,注入FITC标记抗体,标记抗体与IgG结合,三者形成双抗体夹心体系.通过检测FITC标记二抗的荧光强度,可确定血清中免疫球蛋白G(IgG)的含量.该法采用可更新表面技术,固相抗体一次性使用,减少了测定所需的时间,加快了分析速度.在0.2-7.0μg/ml范围内,IgG与荧光强度有良好的线性关系,R=0.9988.高、中、低三种浓度血清样品的日内精密度分别为3.6﹪、2.9﹪、1.9﹪,日间精密度分别为8.9﹪、6.3﹪、4.3﹪.回收率为93.8﹪-109﹪,分析速度为11次/h.该法测定人体血清中IgG的含量,与免疫浊度法的测定结果基本一致.

目录

摘要

Abstract

第一章绪论

1.1顺序注射可更新表面分析技术及其发展

1.1.1顺序注射可更新表面分析技术的基本原理

1.1.2顺序注射可更新表面技术的特点

1.1.3顺序注射可更新表面分析技术的发展历史

1.2顺序注射可更新表面技术的主要仪器部件

1.2.1驱动输液系统

1.2.2可更新表面流通检测池

1.2.3检测系统

1.2.4可更新表面分离柱

1.3 顺序注射可更新表面技术的应用

1.3.1金属离子的测定

1.3.2酶反应检测

1.3.3细胞功能检测

1.3.4免疫分析

1.3.5滴定

1.3.6生物配位作用检测

1.4结论

1.5参考文献

第二章顺序注射可更新表面固相荧光分析法用于药物制剂中维生素B1的测定

2.1前言

2.2实验部分

2.2.1仪器与实验装置

2.2.2试剂

2.2.3样品的制备

2.2.4操作过程

2.3结果与讨论

2.3.1系统的建立

2.3.2测定维生素B1的初步实验

2.3.3实验条件的优化

2.3.4干扰测定

2.3.5分析特性

2.3.6应用

2.4结论

2.5参考文献

第三章顺序注射可更新表面荧光免疫分析法用于人体血清中免疫球蛋白G(IgG)的测定

3.1前言

3.2实验部分

3.2.1仪器设备

3.2.2试剂

3.2.3溶液的配制

3.2.4固相抗体的制备

3.2.5 SIRSI检测系统

3.2.6操作系统

3.3结果与讨论

3.3.1顺序注射可更新表面荧光免疫分析体统的设计

3.3.2实验参数的优化

3.3.3分析特性

3.3.4应用

3.4结论

3.5参考文献

致谢

附已发表的论文