聚乙二醇修饰重组人肿瘤坏死因子-α的合成和分离纯化

摘要

分别以重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NHS-PEG-MAL的摩尔比为1∶ 5、1∶ 20、1∶ 40、1∶ 60,于不同时间下进行PEG化反应.反应混合物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定和Image Master 图象分析系统定量凝胶中游离蛋白质,评价蛋白质PEG化程度;采用灌注色谱技术,通过阳离子交换柱分离纯化反应混合物.结果显示:SDS-PAGE法可使游离TNF-α与PEG-TNF-α达到完全分离;TNF-α的PEG化程度随PEG量和反应时间的增加而提高.反应混合物被阳离子交换柱分离成PEG、PEG-TNF-α混合物和游离TNF-α.