反相高效液相色谱法测定小鼠中脑内D-天冬氨酸和D-谷氨酸

摘要

建立了测定生物样品中微量D-天冬氨酸、D-谷氨酸的高效液相色谱法.以邻苯二甲醛(OPA)-N-异丁酰基-L-半胱氨酸柱前衍生氨基酸对映体,醋酸钠-甲醇-乙腈混合液为流动相,在Shim-pack VP-ODS柱上,采用梯度淋洗技术,2种氨基酸对映体在40 min内完全分离.以荧光检测,D-天冬氨酸(D-Asp)、D-谷氨酸(D-Glu)的浓度在1.0×10-8～1.0×10-6 mol/L时,其浓度与峰面积呈良好的线性关系.当信噪比为3(S/N=3)时,D-Asp和D-Glu的检出限分别为2.0×10-9 mol/L和1.0×10 mol/L.将方法运用于帕金森模型小鼠中脑中D-Asp和D-Glu含量的测定,对照组与模型组中脑D-Asp含量无显著性差异,D-Glu含量呈现显著性差异.推测在脑组织里,内源性的D-Asp的合成及转运不受神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MTPT)的毒害仍保持原有的动态平衡;而D-Glu可能具备与L型对映体相似的兴奋毒性,参与帕金森疾病的发病机制.