反相高效液相色谱法分离纯化野蚕黑卵蜂寄主识别利它素

摘要

采用反相高效液相色谱和酶联免疫分析的方法进行了野蚕黑卵蜂寄主识别利它素分离和免疫活性测定.RP-HPLC的分离条件是:C8反相色谱柱,在柱温30℃、流量1 mL/min的条件下,用0～2 min,100% A(5%乙腈+0.05%三氟乙酸);2～6 min,100% A→100% B(95%乙腈+0.05%三氟乙酸)线性洗脱;6～8 min,100% B进行洗脱,DAD检测波长为280 nm.通过比较家蚕和野桑蚕色谱图发现,无论是粗提物还是上清液两者的峰形极其相似,有5个主要的馏分.通过粗提物和低温物理快速分离上清液的色谱图比较,确定了2号峰为低温物理快速法沉淀部分的馏分.收集家蚕的5种主要馏分,分别用利它素抗血清进行ELISA检测,证实2号峰是野蚕黑卵蜂寄主识别利它素,其免疫活性分别是上清液中其它馏分的100倍至1000倍.