酶联免疫分析

摘要： 螺虫乙酯是一种杀虫杀螨剂,它通过抑制乙酰辅酶A羧化酶活性,阻断害虫正常的能量代谢,最终致其死亡。由于其作用高效,被广泛应用于防治果蔬中的刺吸口器类害虫和害螨。然而,螺虫乙酯对人和动物有毒性。该研究旨在通过制备螺虫乙酯的单克隆抗体并建立酶联免疫分析方法实现蔬菜、水果和环境样品中螺虫乙酯残留的快速检测。首先设计合成了一种新型的螺虫乙酯半抗原,通过活泼酯法偶联牛血清白蛋白得到免疫原,免疫小鼠筛选得到特异性识别螺虫乙酯和B-enol的单克隆抗体(mAb 3D11G7)。在优化的条件下,建立间接竞争酶联免疫分析方法(indirect homologous competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA),其半数抑制质量浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值为2.1μg/L,最佳工作范围为0.5~8.6μg/L。选择河水、土壤、番茄和柑橘基质进行加标回收实验,其平均加标回收率为72.9%~110.1%。该研究建立的icELISA与超高效液相色谱-串联质谱测定柑橘样品结果的相关性R^(2)为0.9652,即两种方法的检测结果具有一致性。以上结果表明,该研究开发的icELISA能够用于监测蔬菜、水果和环境样品中螺虫乙酯的残留。

摘要： 该研究利用桔青霉素(CIT)结构中的羧基、活泼氢和羟基分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)和血蓝蛋白(KLH)进行偶联制备全抗原。经小鼠免疫,采用间接竞争酶联免疫吸附(IC-ELISA)法筛选出具有最佳竞争性反应的配对抗血清和包被抗原,并构建快速检测葡萄酒中CIT的IC-ELISA法。结果表明,最优抗血清为免疫CIT-KLH(H)的血清,包被抗原为CIT-BSA(H),基于此构建的IC-ELISA法的检测线性范围为0.1~100μg/L(R^(2)=0.96988),检测限为0.1μg/L,桔青霉素抗血清半数抑制浓度(IC_(50))值为9.8μg/L,抗血清对沙丁胺醇、莱克多巴胺、展青霉素和黄曲霉毒素B1无交叉反应性。该方法在葡萄酒中检测CIT的加标回收率为92.01%~119.33%,加标回收率试验结果的相对标准偏差(RSD)为2.35%~5.22%,体积分数14%的乙醇对IC-ELISA检测结果无显著性影响(P>0.05),表明可直接上样快速检测葡萄酒中残留的桔青霉素。

摘要： 呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)是一种主要由禾谷镰刀菌产生的单端孢霉烯族化合物,具有很高的细胞毒素及免疫抑制性质,对人类和动物健康造成严重威胁。采用将辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗(HRP-IgG)偶联在金纳米颗粒(AuNPs)上,制备出一种高活性的酶-金纳米复合物(HRP-IgG-AuNPs),将其应用于酶联免疫分析(ELISA)方法中,建立了一种高灵敏检测DON的纳米金增强ELISA方法。该方法的检测灵敏度(IC50)为0.28 ng/mL,检测范围为0.01~10 ng/mL。与传统ELISA方法相比,该方法的灵敏度提高约13倍,且方法准确度高、成本低,具有良好的应用前景。

摘要： 为构建莠去津的快速监测技术,本试验通过美洲驼免疫,成功建立了基于美洲驼多克隆抗体的莠去津的酶联免疫检测方法,通过棋盘法确定了最佳包被抗原和抗血清稀释倍数,对影响反应的关键因素进行了优化,并进行了交叉反应性试验和添加回收试验。结果表明:通过优化反应体系,确定最优NaCl浓度为0.2 mol/L,最优甲醇浓度为5%,最佳缓冲液pH值为7.4,在最优条件下,间接竞争酶联免疫分析法的IC_(50)为12.13 ng/mL;同时利用其他3种三氮苯类除草剂及常见环境代谢物进行了多克隆抗体的特异性试验,其对特丁津、西玛津和对去异丙基莠去津的交叉反应率较高,其他化合物交叉反应率较低;取河流水进行了实际样品的添加回收试验,试验结果与LC-MS比对,添加回收率在90.1%~114.2%之间,说明驼源多克隆抗体的莠去津间接竞争酶联免疫吸附分析方法可用于检测环境实际样品。

摘要： 目的:探讨2型糖尿病肾病患者血清血管生成抑制蛋白l(Vasohibin-1,VASH-1)、25-羟基维生素D(25-OH-VD)、血管内皮生长因子((Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、胱抑素C(Cystatin C,Cys C)、空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG)联合检测对2型糖尿病肾病患者早期诊断的临床应用价值.方法:选择确诊为2型糖尿病肾病的患者166例,同时选择60例健康正常人为对照组,分析2型糖尿病肾病与VASH-1、25(OH)VD、VEGF、Cys C的相关性.结果:2型糖尿病肾病患者的VASH-1、VEGF、Cys C在血清中的水平显著升高,较正常对照组有显著性差异(P<0.05),且与病情的进展呈正相关;而25-OH-VD浓度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).随病情进展25-OH-VD缺乏加重,糖尿病肾病患者血浆中25-OH-VD水平与UACR及FPG呈负相关.结论:VEGF是血管、淋巴内皮细胞的生长、分化及正常和异常血管新生的重要的调节因子,在生理和病理性血管新生中起重要作用.2型糖尿病患者随着DN微血管病变的进展,通过负反馈作用使得血清VASH-l浓度明显升高,对VEGF诱导的以出芽方式血管生成起到抑制作用,从而达到对肾脏的保护作用.糖尿病肾病患者血清中25-OH-VD水平低于健康人群,25-OH-VD缺乏与糖尿病肾病严重程度相关.

摘要： 本研究制备了一种抗杀螟硫磷生物素化纳米抗体并将其应用于免疫分析方法检测食品中杀螟硫磷残留.将杀螟硫磷人工抗原免疫羊驼,四次免疫后从外周血单核细胞获取羊驼的重链抗体可变区(VHH)基因,构建了纳米抗体基因文库,库容量为107 cfu.通过噬菌体表面展示技术进行四轮淘筛,得到9株不同序列的纳米抗体,优选了灵敏度最高的Nbsm6克隆.将Nbsm6基因克隆到pINQ载体中进行定向生物素化并可溶性表达与纯化,用于构建间接竞争酶联免疫分析方法.在最优工作条件下,该方法检测杀螟硫磷半抑制浓度(IC50)为2.0 ng/mL,线性范围(IC20～IC80)为0.6～6.9 ng/mL,检测限(IC10)为0.3 ng/mL.选择白菜、生菜及橘子为样品进行添加回收实验,样品经QuEChERS净化后稀释20倍可消除基质效应,添加回收率在88.9％～117.4％之间,变异系数(CV)在6.2％～16.3％之间.该方法灵敏度高,样品前处理方便,可用于杀螟硫磷的快速筛查.

摘要： [目的]基于酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测原理,建立高灵敏度的直接竞争法检测木薯粉及其制品中的黄曲霉毒素B1(AFB1),为木薯食品安全提供技术支持.[方法]通过对AFB1抗原结构改造、免疫和细胞融合等过程获得抗原抗体,建立高灵敏度检测方法,并进行木薯粉及其制品样本的实例验证.[结果]制备的AFB1抗原和抗体,其抗体亚型均为IgG1,灵敏度最高的3F2细胞株产生的抗体对黄曲霉毒素G1、G2和B2交叉反应率分别为21.4％、1.9％和8.8％,且对其他毒素类无交叉反应,建立的ELISA线性区间为0.02～0.48μg/kg,半数抑制浓度(IC50)为0.047μg/kg,标准方程为y=-3.074x-4.3066(R2=0.9978).以35％甲醇水溶液作为标准品稀释液,木薯食品原料用70％甲醇水溶液加0.2 g NaCl作为提取液,含油脂的木薯糕点用70％甲醇水溶液作为提取液,所有样本均为10倍稀释,检测限0.2～4.8μg/kg,样品添加回收率81.5％～120.0％,变异系数均小于8.5％.应用验证试验表明,自建ELISA试剂盒对96份样本检出19份阳性样本,购买试剂盒检出7份阳性,大于2.0μg/kg的样本检测结果完全符合,自建ELISA试剂盒方法灵敏度优于购买的ELISA试剂盒.[结论]本研究建立的直接竞争ELISA方法灵敏度高,操作简单,可广泛应用于木薯粉及其制品样本中AFB1的快速测定.

摘要： 拟除虫菊酯类农药由于具有较高的杀虫活性和低的哺乳动物毒性,被广泛应用在农业、林业、畜牧业及家庭卫生中.尽管拟除虫菊酯类农药对于人类相对安全,若拟除虫菊酯类农药大量使用,则会引起对人类免疫系统的危害,因此建立一种灵敏、快速和有选择性的拟除虫菊酯类农药残留检测方法十分必要.

摘要： 本文综述了近年来以分子印迹材料为基础的药物分析新方法及其在临床样本(血浆、尿液)中的应用,详细评述了基于分子印迹技术的固相萃取、固相微萃取、磁性固相萃取、传感器和酶联免疫分析等最新进展,为我国临床药物分析新方法研究提供参考.

摘要： 应用人工合成免疫原免疫动物、杂交瘤融合技术制备出抗磺胺二甲嘧啶的单抗及多抗。抗体亲和常数均大于1.0×108 L/mol。利用多抗2510建立酶联免疫分析方法。该方法测量范围为0.1～30 ng/mL,灵敏度为0.08 ng/mL,批内变异<15%,批间变异<21%。不同样品回收率在80.5%～137.8%之间,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.997。

摘要： 目的:利用酶联免疫分析(EIA)技术,建立人体液内5-羟色胺的快速检测方法及研制其诊断试剂。方法:采用双抗体夹心法建立5-HT-EIA,80例正常人血清检测做对照,研究建立酰化试剂技术。结果:研制试剂的指标评价表明,方法的线性测量范围为1.5-100ng/ml,灵敏度为1.5ng/ml,批内批间的精密度分别为2.01﹪-6.07﹪和2.20﹪-7.72﹪。与其他神经介质无交叉反应。测得血清内5-HT含量均值为58ng/ml。结论:成品检测正常结果与报道正常人血清5-HT含量范围一致。稳定性及抗干扰性均略好于进口对照产品。

摘要： 将双氯芬酸(Diclofenac,DCF)与牛血清白蛋白(BSA)通过活化酯法偶联制备人工免疫原,免疫新西兰大白兔制得抗双氯芬酸的多克隆抗体;用生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System BAS)标记抗体,建立了测定双氯芬酸的BA-ELISA方法.线性范围为1.0-1.0×10 5ng/L;最低检测浓度为IC90=2.6ng/L.用于环境水样中双氯芬酸的测定,回收率为93.5-118.4％.

摘要： 运用酶联免疫分析方法定量测定鲤鱼中恩诺/环丙沙星残留量。测试曲线线性范围为10～810μg/kg，最低检测限为10μg/kg。向样品中分别添加20、100和500μg/kg 3个浓度水平的恩诺沙星，平均回收率分别为80％、80.9％和76.6％。

摘要： 自从在油炸及烧烤的淀粉类食品中检测到具有潜在致癌风险的丙烯酰胺副产物后，发展简单实用的丙烯酰胺检测方法的研究备受重视。以N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯(NAS)为半抗原，成功制备了对丙烯酰胺具有特异性识别和结合作用的多克隆抗体，建立了能够对淀粉类食品中丙烯酰胺进行快速检测的生物素-亲和素酶联免疫分析方法。

摘要： 目的:用进口注射剂Neulasta为对照品,评价国产注射剂聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)的相对生物利用度并比较两者的药动学参数.方法:采用自身随机交叉给药方案,6只猕猴分别scPEG-rhG-CSF和Neulasta,按设计采集144h内动态血标本;用酶联免疫分析检测(ELISA)法测定血药浓度,实验数据用3P97药动程序拟合并计算药动学参数,用NDST和SPSS软件包中相关程序,对两者的主要药动学参数进行配对t检验或非参数检验,以判断药动学行为的一致性.结果:猕猴自身交叉scPEG-rhG-CSF和Neulasta150μg/kg后的主要药动学参数:平均达峰时间tmax(实测值)分别为(10.33±1.51)h和(9.67±1.51)h;平均峰浓度Cmax(实测值)分别为(2142±581)ng/mL和(2151士497)ng/mL;平均消除半衰期t1/2ke分别为(20.1±2.4)h和(20.0士2.5)h;平均清除率CL分别为(3.1±0.9)mL/(kg·h)和(2.7±0.7)mL/(kg·h);平均药时曲线下面积ACU(0～144h)(统计矩法)分别为(54042士13407)h·ng/mL和(60629±12958)h·ng/mL;平均残留时间MRT分别为(30.27士2.71)h和(30.35±2.61)h;试验样品PEG-rhG-CSF相对于对照品Neulasta的相对生物利用度为(89.0±11.4)％.药动学参数比较结果显示,PEG-rhG-CSF与Neulasta在AUC、Cmax、tmax、t1/2ke、CL和MRT等主要药动学参数间都无显著性差异.结论:两种注射剂的药动学行为基本一致.

摘要： 本文介绍了酶联免疫分析测定的基本原理和分类，以及它的关键技术环节，阐述了酶联免疫在农残上的研究现状，探讨了酶联免疫测定技术存在的问题及应用前景。

摘要： 目的：评估硼酸亲和层析法(A法)检测GHbA1c的临床效果。rn 方法：利用高效液相色谱法(HPLC(B法))检测118例全血GHbA1c水平，A法同步盲测。计算二者的相关系数、灵敏度、特异性和总符合率，同时对溶血、黄疸等可能的干扰因素进行评估。rn 结果：两种方法的灵敏度、特异性和总符合率分别为100%、92.3%和97.1%，相关系数r为0.980，表明两种方法的检测结果具有较高的一致性和等效性。rn 结论：硼酸亲和层析法检测GHbA1c具有结果准确，用血量少，检测时间短，随机检测，单标本独立检测，适合急诊、基层医疗机构、糖尿病患者病情和治疗效果的个人监测，具有很高的临床实用前景。

摘要： 目的：评估硼酸亲和层析法(A法)检测GHbA1c的临床效果。rn 方法：利用高效液相色谱法(HPLC(B法))检测118例全血GHbA1c水平，A法同步盲测。计算二者的相关系数、灵敏度、特异性和总符合率，同时对溶血、黄疸等可能的干扰因素进行评估。rn 结果：两种方法的灵敏度、特异性和总符合率分别为100%、92.3%和97.1%，相关系数r为0.980，表明两种方法的检测结果具有较高的一致性和等效性。rn 结论：硼酸亲和层析法检测GHbA1c具有结果准确，用血量少，检测时间短，随机检测，单标本独立检测，适合急诊、基层医疗机构、糖尿病患者病情和治疗效果的个人监测，具有很高的临床实用前景。

摘要： 目的：评估硼酸亲和层析法(A法)检测GHbA1c的临床效果。rn 方法：利用高效液相色谱法(HPLC(B法))检测118例全血GHbA1c水平，A法同步盲测。计算二者的相关系数、灵敏度、特异性和总符合率，同时对溶血、黄疸等可能的干扰因素进行评估。rn 结果：两种方法的灵敏度、特异性和总符合率分别为100%、92.3%和97.1%，相关系数r为0.980，表明两种方法的检测结果具有较高的一致性和等效性。rn 结论：硼酸亲和层析法检测GHbA1c具有结果准确，用血量少，检测时间短，随机检测，单标本独立检测，适合急诊、基层医疗机构、糖尿病患者病情和治疗效果的个人监测，具有很高的临床实用前景。

摘要： 本发明涉及酶联免疫检测技术领域，具体的说是一种酶联免疫转移机构及酶联免疫工作站；包括依次设置的制冷机构、转移机构、注液机构和读数机构；所述注液机构包括托板，所述注液机构还包括震荡单元和压力传感器；所述托板上端面设置有凹槽；所述震荡单元和压力传感器安装在凹槽内，当孔板内注射入一定量的液体后，托板通过压力传感器实现对孔板的重量监测启动震荡单元对孔板进行震荡；本发明通过在托板内固连压力传感器实现对孔板重量的检测，从而启动震荡单元对孔板进行震荡，实现自动化，将震荡位与孵育位结合减少酶联免疫工作台所占的空间，减去了转移机构在震荡位与孵育位之间的转移的这一操作步骤，节约时间，提高了工作效率。

摘要： 本发明公开一种酶联免疫转移机构及酶联免疫工作站，立板侧部设有震荡位,与震荡位并列设置有一个基准孵育位,基准孵育位下方设有若干层缓存孵育位,相邻两层缓存孵育位之间形成有转移通道；底板外侧连接有转移单元，转移单元设有机械手，机械手通过转移通道将置于基准孵育位上的载体架转移到缓存孵育位上。洗板位上方设有洗板头，洗板头连接有洗板针，洗板头外侧连接有移动载架，洗板头连接有Y向洗板电机，转移单元通过转移通道将置于缓存孵育位上的载体架转移到洗板位上进行冲洗，洗板位下方设有洗板导液槽，洗板导液槽设有导液孔。本发明分层式设计，能在不同的孵育和洗板区域进行转移，占用空间少，效率高。

摘要： 酶联免疫试剂盒及用酶联免疫试剂盒检测牛乳铁蛋白的方法，它涉及一种试剂盒及其试剂盒检测牛乳铁蛋白的方法。本发明解决了现有的牛乳铁蛋白的检测方法存在的检测成本较高、操作复杂的问题。本发明酶联免疫试剂盒包括酶联板、牛乳铁蛋白标准品、样品稀释液、检测溶液、底物溶液、洗涤液和终止液；本发明的检测方法主要经过溶液的配制，将抗体结合在酶联板上，封闭酶联板，将标准品、待测样品固定在酶联板上，然后用酶标仪检测光吸收值，并根据检查结果制作标准曲线，然后计算出待检测样品的牛乳铁蛋白血清的含量。本发明的方法采用了工作液形式，成本低廉，本发明的酶联免疫试剂盒检测牛乳铁蛋白含量的方法操作简单。

摘要： 本实用新型公开一种酶联免疫转移机构及酶联免疫工作站，立板侧部设有震荡位,与震荡位并列设置有一个基准孵育位,基准孵育位下方设有若干层缓存孵育位,相邻两层缓存孵育位之间形成有转移通道；底板外侧连接有转移单元，转移单元设有机械手，机械手通过转移通道将置于基准孵育位上的载体架转移到缓存孵育位上。洗板位上方设有洗板头，洗板头连接有洗板针，洗板头外侧连接有移动载架，洗板头连接有Y向洗板电机，转移单元通过转移通道将置于缓存孵育位上的载体架转移到洗板位上进行冲洗，洗板位下方设有洗板导液槽，洗板导液槽设有导液孔。本实用新型分层式设计，能在不同的孵育和洗板区域进行转移，占用空间少，效率高。

摘要： 本发明公开了一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用，属于纳米材料技术领域。该多孔二氧化铈纳米棒复合结构由二氧化铈纳米棒及包被于其外表面的抗原或抗体组成；该氧化铈纳米棒复合结构制备的模拟酶溶液对抗体或抗原的检测响应范围宽、灵敏度高，检测限能够达到10pg/mL的水平，制备方法简单易行，Elisa检测方法易操作、环境适应性好、不受环境温度影响。

摘要： 本发明公开了属于酶联免疫检测技术领域的一种胃蛋白酶酶联免疫分析检测试剂盒。该试剂盒由固相酶标板、胃蛋白酶标准品、辣根过氧化物酶标记的胃蛋白酶抗体和辅助试剂组成。本发明的试剂盒使用时将胃蛋白酶标准品与样本中待测胃蛋白酶同时等体积加入固相抗体板中，经过反应洗涤后再加入酶标抗体，经过反应洗涤后加入显色剂，根据颜色深浅判断待测物中胃蛋白酶的含量；用该方法检测62份正常人唾液和23例反流性食道炎患者唾液，表明该方法实用可靠。

摘要： 一种酶联免疫分析方法及全自动酶联免疫分析仪，所述分板仪包括机架组件、洗涤组件、加样/加试剂组件、加热及温度控制组件、液路系统、输入输出装置、光学测量组件、控制系统；所述机架组件包括机架底板，在机架底板上设有支柱，在支柱上从下往上依次设有下固定板和上固定板，在下固定板和上固定板之间设有圆形反应盘，所述圆形反应盘通过中心轴与上固定板和下固定板连接，在下固定板下部固定设有第一电机，第一电机通过第一传动机构带动圆形反应盘转动。本发明在使用时只要有一份样品即可进行对应项目的检测而无试剂的浪费；无需将检测试剂分别用不同的试剂瓶来盛装，不但操作极为简便，而且不容易造成操作差错，从而保证检测结果的正确性。

摘要： 本发明公开了一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用，属于纳米材料技术领域。该多孔二氧化铈纳米棒复合结构由二氧化铈纳米棒及包被于其外表面的抗原或抗体组成；该氧化铈纳米棒复合结构制备的模拟酶溶液对抗体或抗原的检测响应范围宽、灵敏度高，检测限能够达到10pg/mL的水平，制备方法简单易行，Elisa检测方法易操作、环境适应性好、不受环境温度影响。

摘要： 本发明公开了属于酶联免疫检测技术领域的一种胃蛋白酶酶联免疫分析检测试剂盒。该试剂盒由固相酶标板、胃蛋白酶标准品、辣根过氧化物酶标记的胃蛋白酶抗体和辅助试剂组成。本发明的试剂盒使用时将胃蛋白酶标准品与样本中待测胃蛋白酶同时等体积加入固相抗体板中，经过反应洗涤后再加入酶标抗体，经过反应洗涤后加入显色剂，根据颜色深浅判断待测物中胃蛋白酶的含量；用该方法检测62份正常人唾液和23例反流性食道炎患者唾液，表明该方法实用可靠。

摘要： 本实用新型公开了一种ELISA酶联免疫分析实验酶标包被板放置装置，包括用于承托试剂盒放置板的装置本体；装置本体为长方体，长方体的顶部开口；装置本体的材质为透明塑料，其底部设置装置底板；装置底板下表面设置透明卡片槽；卡片槽的槽底面积与装置底板面积相同；卡片槽的三个边均粘合固定于装置底板上，其另一边开设卡片槽入口；位于卡片槽入口处的卡片槽上开设弧形开口，且在卡片槽入口边端设置与弧形开口相配合的盖帽，盖帽上设置与卡槽配合的卡扣；卡片槽内容置纸张，纸张为长方形；长方形的纸张上均匀分布若干个单元方格，并在每个单元方格内画设圆孔；若干所述圆孔上进行不同颜色的标识。