人骨形态发生蛋白-1(hBMP-1)成熟肽的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

采用PCR方法从BMP-1的cDNA中克隆了BMP-1成熟肽的编码基因,删除了BMP-1前体分子N端的信号肽序列和C端的其他序列.用HindⅢ消化1.3Kb的PCR产物,将0.84和0.46Kb两片段分别克隆到pUC载体中进DNA序列分析.分别酶切回收EcoR-HindⅢ和Hind Ⅲ-BamH I两目的基因片段,与大肠杆菌表达载体pBV-220进行退火连接,使插入基因受控于PRPLO启动子.将含有BMP-1成熟肽编码基因重组表达质粒pBVBMP-1转化大肠杆菌宿主细胞进行温度诱导表达.结果表明,经42℃热诱导后,大肠杆菌能以包涵体形式表达BMP-1成熟肽,其分子量约为52kDa.