用Bubble PCR法对一个新的锌指基因进行外显子划界

摘要

介绍了一种确定基因外显子－内含子交界点的快速、准确的方法，应用该方法对本室克隆的一个新的锌指基因ＺＮＦ１９１进行了外显子划界。将含有ＺＮＦ１９１全长ｃＤＮＡ的基因组ＤＮＡ经限制酶酶切后与退火的Ｂｕｂｂｌｅ ｌｉｎｋｅｒ连接，以该连接产物为模板，用依据ｃＤＮＡ序列设计的引物和Ｂｕｂｂｌｅ ｌｉｎｋｅｒ上的特异引物进行ＰＣＲ扩增，继以相同的扩增条件对扩增产物进行测序，从而确定了外显子－内含子的交界点。