永生化肝脏前体样细胞可用于生物人工肝治疗的研究

摘要

目的 对肝前体样细胞(hepatocyte-derived liver progenitor-like cells,HepLPC)进行功能验证,为生物人工肝应用寻找新的种子细胞。方法通过两步分离法分离人原代肝细胞,荧光激活细胞分选术纯化肝细胞以排除CD24 +或EpCAM +阳性祖细胞获得HepLPC,采用Large T 抗原对HepLPC进行永生化(iHepLPC),从细胞形态、增殖状态、功能基因水平、解毒与合成水平以及急性肝衰竭毒性血浆的反应对iHepLPC进行综合评估,判断其是否具有相应的功能。结果 永生化后iHepLPC可以在不同代次间快速稳定的增殖,P0、P10与P20代次之间同一时间点细胞的增殖速度相似,差异无统计学意义( P >0.05),细胞形态保持不变,增殖过程中的细胞解毒与合成功能稳定,代次之间差异无统计学意义( P > 0.05);对iHepLPC细胞进行M7分化,分化后细胞的功能基因有显著的提高,尿素生成(13.683±1.238)高于未分化的7.769±0.323( P <0.01);分化后白蛋白合成11.270±0.63,高于未分化的5.655±0.025( P <0.01);对于急性肝衰竭血浆具有一定的耐受力同时发挥着解毒与合成功能,6 h候后尿素合成达到(8.25±0.31)mg/(dL·10^6细胞·d),白蛋白合成达到(12±0.41)ng/(mL·10^6细胞·d)。结论 永生化后的HepLPC在快速增殖的过程中可以保持细胞形态、解毒与合成功能不变,对急性肝衰竭血浆具有一定的耐受力是新的生物人工肝细胞源。