用PCR方法快速检测用拉米夫定治疗的乙型肝炎病人中HBV P基因区codon 550的变异

摘要

目的建立一种快速特异的乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的检测方法.方法针对HBV codon 550位置设计2条高度特异的的引物,用PCR方法进行DNA扩增.根据电泳结果可分析下列2种情况:(1)A741G变异型(YVDD);(2)G743T变异型(YIDD).用该方法对32例病人在拉米夫定治疗前(0周),治疗中(52周和104周)共61份血清进行YMDD变异检测.结果特异性:10例病人分别做0周和52周标本codon 550特异性PCR和DNA测序.0周血清检测结果全部为野生型,52周血清中5例为A741G,2例为G743T,两种方法的检测结果完全相同.敏感性:61份血清中2例血清PCR未能检出阳性,codon 550变异为29份,野生型为30份,和葛兰素威康公司检测结果的符合率为98.3%.混合变异株检测3例病人104周血清用PCR测定发现同时存在A741G和G743T两种变异株,其中2例结果经多克隆测序的方法得到确证.结论HBV codon 550特异性PCR方法具有快速、简便和经济实用的优点,适用于临床拉米夫定治疗病人HBV YMDD变异的跟踪测定.