短发夹高迁移率族蛋白B1真核细胞表达载体通过HOXA9下调人脐静脉血管内皮细胞表达E-选择素

摘要

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）激活表达E-选择素的分子机制。方法将同源盒转录因子（HOXA9）小干扰RNA（siRNA）短序列转染至对数生长期的HUVEC，采用实时荧光定量聚合酶链反应（实时qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测其对HOXA9 mRNA和蛋白表达的影响；另设空白对照组和无意序列nonsilence阴性对照组。取已经稳定转染pRNA-u6.1/Neo-HMGB1 shRNA质粒的HUVEC（低表达HMGB1的HUVEC），采用实时qPCR法检测HOXA9和E选择素的mRNA表达；另设nonsilence转染组作为阴性对照。将HOXA9 siRNA转染至低表达HMGB1的HUVEC中作为共同转染组，采用实时qPCR法检测E-选择素的mRNA表达；以HMGB1 shRNA组和HOXA9 nonsilence组作为对照。结果①空白对照组HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）和蛋白（积分A值）表达分别为1.094±0.115和1.031±0.060。与无意序列nonsilence转染组比较， HOXA9 siRNA转染组可显著降低HUVEC细胞中HOXA9的mRNA和蛋白表达〔HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）：0.257±0.030比1.035±0.091，t＝14.010，P＝0.002；HOXA9蛋白（积分A值）：0.278±0.042比0.975±0.014，t＝27.310，P＝0.002〕。②与nonsilence转染组比较， HMGB1 shRNA转染上调了HUVEC中HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）表达（2.519±0.278比0.856±0.063，t＝10.100， P＝0.001），同时下调了E-选择素mRNA（2-ΔΔCT）表达（0.311±0.046比1.080±0.201，t＝7.415，P＝0.000）。③与HOXA9 nonsilence组及HMGB1 shRNA组比较，HMGB1 shRNA和HOXA9 siRNA共同转染后HUVEC细胞中E-选择素 mRNA（2-ΔΔCT）表达明显升高（3.445±0.428比1.085±0.212、1.004±0.104，t1＝8.507， t2＝9.603，均P＜0.001）。结论 HMGB1在HUVEC细胞核内可能通过HOXA9调节E-选择素的表达。