23,24-二氢葫芦素B抑制Nrf2-ARE通路逆转肝癌耐药的实验研究

摘要

cqvip:目的探讨23,24-二氢葫芦素B(DHCB)抑制核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路逆转肝癌细胞耐药的作用机制。方法采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法建立肝癌耐药细胞株Bel-7402/ADM,分为空白对照组、ADM组、DHCB组、ADM+DHCB组、DHCB+TBHQ组和DHCB+N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)组。MTT法和平板克隆实验检测DHCB对Bel-7402/ADM细胞增殖活性的抑制作用;流式细胞术检测DHCB对Bel-7402/ADM细胞活性氧(ROS)含量和细胞凋亡。Western blotting法检测DHCB对Bel-7402/ADM细胞中Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、cleaved caspase-3蛋白表达的影响。结果Bel-7402/ADM细胞对ADM的耐药指数RI为6.56;而经DHCB(4μmol/L)协同作用后,Bel-7402/ADM细胞对ADM的耐药指数RI为2.21。与空白对照组比较,ADM+DHCB组细胞克隆形成率明显降低(P<0.05);MRP1、Nrf2、NQO1和GST-π蛋白表达量下调,cleaved caspase-3蛋白表达量升高(P<0.05)。与Nrf2激活剂TBHQ合用后,DHCB抑制Nrf2/ARE通路的作用被逆转。与空白对照组比较,DHCB可上调Bel-7402/ADM细胞ROS表达水平;与DHCB组比较,DHCB+NAC组细胞ROS表达水平降低。DHCB可明显促进Bel-7402/ADM细胞凋亡。结论DHCB可增强Bel-7402/ADM细胞对ADM的敏感性,其作用机制可能为抑制Nrf2/ARE信号通路,进而促进肿瘤细胞发生氧化应激损伤,诱导细胞凋亡。