GADD45A靶向抑制p38 MAPK通路逆转宫颈癌细胞获得性耐药的实验研究

摘要

目的 探究生长阻滞和DNA损伤诱导45A(GADD45A)对宫颈癌细胞顺铂(DDP)获得性耐药的影响及可能的分子机制.方法 体外培养HeLa细胞,通过DDP诱导建立HeLa耐药细胞HeLa/DDP,实时荧光定量PCR(qPCR)检测GADD45A表达.将HeLa/DDP细胞分为空白对照组(细胞不做任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照病毒空载体)、GADD45A转染组(转染GADD45A过表达慢病毒载体)、GADD45A+Anisomycin组(细胞转染GADD45A过表达慢病毒载体后加入JNK/p38激活剂Anisomycin).CCK-8法和细胞集落形成法检测HeLa/DDP细胞耐药性.彗星实验和流式细胞术检测DDP对各组HeLa/DDP细胞DNA损伤、细胞周期和凋亡的影响.Western blotting法检测各组细胞p38蛋白表达.结果 HeLa细胞中美好中GADD45A mRNA表达量低于正常宫颈鳞状上皮细胞H8(0.70±0.09 vs.1.00±0.04,P<0.05).HeLa/DDP细胞中GADD45A mRNA表达量低于HeLa细胞(0.48±0.05 vs.0.70±0.09,P<0.05).GADD45A转染组HeLa/DDP细胞对DDP的耐药指数低于空白对照组(23.57±1.26 vs.76.55±5.79),且细胞集落数量减少(119±26 vs.415±33),同时DNA损伤率增加[尾长(75.26±19.83)μm vs.(21.47±6.41)μm],S期细胞比例升高[(34.22±1.49)％vs.(15.40±2.98)％],细胞凋亡率增加[(40.98±4.59)％vs.(5.56±0.77)％],差异具有统计学意义P<0.05).与空白对照组比较,GADD45A转染组HeLa/DDP细胞GADD45A蛋白表达增强,但p-p38/p38蛋白比值降低(P<0.05).GADD45A+Anisomycin组上述指标较GADD45A组被逆转.结论 在DDP耐药宫颈癌细胞中GADD45A表达普遍下调,上调GADD45A表达可以降低HeLa/DDP细胞活性,增加DDP诱导细胞凋亡和DNA损伤,且与抑制p38磷酸化激活有关.