Cathepsin B通过ERK信号通路促进人肺癌细胞A549增殖和迁移

摘要

目的 探讨组织蛋白酶B(CTSB)对人肺癌细胞A549增殖和迁移的影响及其对ERK信号通路的调控作用.方法 实时荧光定量PCR(QPCR)法检测人肺癌细胞A549、SPC-A1以及H460中的CTSB mRNA水平;利用靶向CTSB的shR-NA构建稳定低表达CTSB的A549细胞株,命名为A549/shRNA;转染空载体的A549细胞作为对照组.通过MTI法检测CTSB表达下调后A549细胞的增殖情况;通过Transwell法检测CTSB表达下调后A549细胞迁移能力的变化;Western blotting检测A549细胞在CTSB表达下调前后的ERK以及磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白表达水平.结果 3种肺癌细胞株均检测到不同程度的CTSB mRNA表达,其中肺癌A549细胞的CTSB mRNA表达最高;转染CTSB shRNA的A549细胞在mRNA和蛋白水平上均较对照组显著降低(P＜0.01).与对照组比较,A549/shRNA组的增殖能力显著降低(P＜0.01);A549/shRNA组穿过小室的迁移细胞数目为97.33±9.61,显著低于对照组(167.33±16.17),差异有统计学意义(P＜0.01).A549/shRNA组细胞的磷酸化ERK蛋白的表达较对照组显著下调(P＜0.01).结论 CTSB可能通过影响ERK信号通路中ERK蛋白的磷酸化来调节人肺癌细胞的增殖和迁移,提示CTSB参与肺癌的发生发展,可能为肺癌的诊断和治疗提供了新靶点.