DHA对UVB和砷引起的DNA损伤的预防作用

摘要

目的 探讨DHA对于紫外线B(UVB)照射和砷诱导的正常小鼠上皮细胞DNA损伤是否具有预防保护作用.方法 采用不同浓度(25、50、75、100 μmol/L)DHA处理小鼠上皮细胞株JB6,加入5μmol/L砷并进行UVB照射(照射能量为240 mJ/cm2),将未进行UVB照射和砷处理的细胞设为空白对照组.MTT实验检测JB6细胞活性,免疫荧光实验检测γH2AX的表达,彗星实验检测DNA损伤程度,Western blotting法检测DNA修复相关蛋白及抗氧化酶的表达水平并用DHE和DCF染色检测在此过程中活性氧簇(ROS)的产生水平.结果 DHA在75、100 μmol/L时能够降低UVB和砷联合作用诱导的细胞死亡;γH2AX的荧光染色及Western blotting检测结果均显示,UVB和砷联合作用导致DNA损伤标志物γH2AX表达水平升高,而DHA预处理的细胞能够明显抵抗UVB和砷引起的γH2AX表达增加,且呈浓度依赖性.彗星实验结果显示,JB6细胞经50、75和100μmol/L的DHA预处理后,降低了UVB和砷导致的彗星尾部DNA含量增加并缩短了尾矩.Western blotting检测显示,DHA可以促进p53表达持续升高,降低其负调控蛋白MDM2的表达,上调DNA修复蛋白Rad52的表达水平.DHA降低了UVB和砷诱导产生的ROS,并且上调了捕捉ROS的过氧化氢酶.结论 DHA减少了JB6细胞死亡并减轻了DNA损伤,为预防UVB和砷导致的非黑色素瘤皮肤癌提供了新的思路.