斑蝥素对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生的影响

摘要

目的:通过细胞培养及建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,探讨斑蝥素对血管内皮损伤后新生内膜增生的作用及机制。方法:采用组织块贴壁法体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),以脂多糖(LPS)作为刺激因素,选择吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐(PDTC)作为核转录因子(NF-κB)信号通路抑制剂,将VSMC分为对照组、1μg/ml LPS刺激组(LPS组)、LPS刺激后加用5μmol/L斑蝥素组(斑蝥素组)、LPS刺激后加用80μmol/L PDTC处理组(PDTC组)、LPS刺激后加用5μmol/L斑蝥素和80μmol/L PDTC处理组(斑蝥素+PDTC组)共5组;应用伤口愈合实验和Transwell实验检测斑蝥素对VSMC迁移的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测斑蝥素对NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。采用Fogarty(2 F)球囊导管建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,SD大鼠随机分为假手术组、损伤组、斑蝥素(2 mg/kg)组,各组于造模前1周开始腹腔注射给药,连续给药3周,术后14 d取血检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的水平,同时取损伤颈动脉进行苏木精-伊红染色、免疫组织化学法检测MMP-9、NF-κB p65、TNF-α及IL-6的表达。结果:伤口愈合实验和Transwell实验结果显示,LPS组细胞的迁移能力显著增强(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,LPS组细胞p-p65和MMP-9表达增加,斑蝥素组或PDTC组表达显著降低(P均0.05)。在大鼠颈动脉球囊损伤模型中,损伤组大鼠血清内TNF-α和IL-6浓度明显升高,斑蝥素组大鼠血清中TNF-α和IL-6浓度较损伤组显著降低(P均<0.05);损伤组大鼠颈动脉内膜增生明显,斑蝥素组较损伤组内膜面积、内膜面积/中膜面积减小(P均<0.05);与损伤组比较,斑蝥素组血管内膜中MMP-9、NF-κB p65、TNF-α和IL-6的表达明显降低(P均<0.05)。结论:斑蝥素对LPS诱导的VSMC的迁移以及对受损大鼠颈总动脉内膜的增生具有显著的抑制作用;其机制主要与抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应密切相关。