核糖核酸干扰抑制心肌细胞KCNJ2基因表达

摘要

目的:构建抑制大鼠心肌细胞KCNJ2基因表达的真核表达质粒,应用RNA干扰技术观察其抑制心肌细胞KCNJ2基因表达的情况,为生物起搏器的研究提供一种新的思路和方法.方法:选择5个针对大鼠心肌细胞基因KCNJ2 mRNA的干扰位点,构建含5个目的基因的重组质粒pEGFP6-1kir2.1.实验组:乳鼠心肌细胞转染pEGFP6-1kir2.1质粒,阴性质粒对照组:转染PEGFP6-IC,空白对照组:未做任何处理.转染大鼠心肌细胞后72 h,通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和 Western-blot,在mRNA和蛋白质水平检测RNA干扰(RNAi)抑制KCNJ2基因表达的效果,并观察细胞搏动频率变化.结果:实验组心肌细胞KCNJ2 mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P＜0.01),两对照组无明显差异.转染后72 h实验组搏动频率增加,显著高于两对照组(P＜0.01),两对照组之间搏动频率无明显差异.结论:RNA干扰技术可用于抑制大鼠心肌细胞KCNJ2基因的表达,为生物起搏器的研究提供了一种新的思路和方法.