谷子茎尖体外遗传转化体系的建立与优化

摘要

以谷子(Seteria italica)豫谷一号为实验材料,建立了一套简便、稳定的体外茎尖遗传转化体系.通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的茎尖转化法,对转化受体采取不同的处理方式,待拟转化株长到三叶期后进行PCR鉴定.探明了草丁膦(Basta)喷施处理用于谷子转基因幼苗筛选的最适浓度,以及2种不同检测方式(直接PCR和喷施Basta+PCR)鉴定转基因植株的效果.在上述基础上,对影响谷子遗传转化体系的多种因素进行优化.结果表明,菌液浓度(OD600)=1.4、侵染液中乙酰丁香酮浓度为800μmol·L-1、侵染压强为0.05 MPa、侵染40分钟有利于谷子茎尖的遗传转化.同时,采用上述优化系统获得谷子转SiCBL4基因植株,通过喷施草丁膦和实时荧光定量PCR对T2代转基因植株进行遗传稳定性分析,可节约检测时间.综上,该研究初步建立了稳定的谷子体外茎尖遗传转化体系,并开发了一种便捷的检测后代转基因植株的组合方法.