Aeropyrum pernixK1磷脂酶A2的克隆、表达及其性质

摘要

从超嗜热需氧古细菌AeropyrumpernixK1中抽提出染色体基因组，经PCR扩增得到磷脂酶A2基因，用带有His-tag标记的pET15b作为表达载体，在大肠杆菌BLP中成功地诱导表达。表达产物经过Ni．螯合柱一步得到纯化。SDS-PAGE检测只有一条带，其准确分子量为17，871kD。对纯化后的磷脂酶A2测定其酶活性和生物活性，得出其最适反应温度为90％，最适pH范围为7．8．8．2。至此首次成功地在大肠杆菌中表达了古细菌嗜热磷脂酶A2，这将为以后对该酶的结构和功能以及耐热机制研究打下很好的基础，同时有利于古细菌研究领域的扩展。