鞣花酸对变异链球菌的体外抑菌作用及机制研究

摘要

cqvip:目的:研究鞣花酸对变异链球菌的体外抑菌作用及可能机制,为其防治龋病的应用提供实验依据。方法:以复方氯己定含漱液为阳性对照、5%二甲基亚砜(DMSO)溶液为阴性对照,采用打孔法抑菌试验测定抑菌圈直径考察50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5 mg/mL鞣花酸对变异链球菌的抑菌效果,并采用微量稀释法测定其对变异链球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。以5%DMSO溶液为阴性对照,采用结晶紫染色法测定1/8MIC、1/4MIC、1/2MIC、MIC鞣花酸对变异链球菌生物膜形成的影响,并在荧光染色后通过激光扫描共聚焦显微镜观察1/2MIC鞣花酸作用后生物膜的结构变化;分别采用苯酚硫酸法和还原型辅酶Ⅰ氧化法考察1/8MIC、1/4MIC、1/2MIC、MIC鞣花酸对变异链球菌细胞外多糖(EPS)的抑制率和细胞外基质中乳酸脱氢酶(LDH)活力的影响。结果:12.5~50 mg/mL鞣花酸对变异链球菌产生了直径均大于15 mm的抑菌圈,50 mg/mL鞣花酸作用下抑菌圈直径与复方氯己定含漱液相当。鞣花酸对变异链球菌的MIC、MBC分别为12.5、25 mg/mL。1/8MIC^MIC鞣花酸作用后细菌生物膜的存活率较阴性对照显著降低(P<0.01),且呈剂量依赖趋势,MIC鞣花酸作用后细菌生物膜的存活率仅为(16.41±1.346)%;荧光染色后显微镜下可见,1/2MIC鞣花酸作用后细菌生物膜结构被破坏;1/8MIC^MIC鞣花酸作用后细菌水不溶性EPS和水溶性EPS的抑制率较阴性对照均显著升高(P<0.01),1/4MIC^MIC鞣花酸作用后细胞外基质中LDH活力较阴性对照均显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖趋势。结论:鞣花酸对变异链球菌的生长具有一定的抑制作用;其机制可能与抑制EPS产生、降低细菌的黏附、破坏细菌细胞膜有关。