草果总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺优化研究

摘要

cqvip:目的:建立草果总黄酮的含量测定方法,并对其大孔吸附树脂纯化工艺进行优化。方法:采用高效液相色谱法测定草果中总黄酮的含量。色谱柱为Eclipse Plus C18,流动相为乙腈-1%醋酸水溶液(15∶85,V/V),柱温为40℃,流速为0.8 mL/min,检测波长为256 nm,进样量为10μL。以吸附、解吸性能为考察指标,采用静态吸附和解吸试验对6种大孔吸附树脂进行筛选,采用静态吸附和解吸动力学试验考察吸附和解吸时间。在单因素试验的基础上,以总黄酮含量(以芦丁计)为评价指标,以上样液质量浓度、上样液p H、乙醇体积分数及洗脱用量为考察因素,采用正交设计优化草果总黄酮的纯化工艺并进行验证试验。结果:芦丁检测质量浓度的线性范围为0.028~0.281 mg/mL(r=0.999 9);定量限为437.5 ng/mL,检测限为109.4 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%,加样回收率为96.24%~99.75%(RSD<2%,n=6)。HPD450型大孔吸附树脂对草果总黄酮的静态吸附和解吸综合能力最适中,最佳静态吸附与解吸时间均为12 h。最优纯化工艺为上样质量浓度1.854 4 mg/mL,上样液pH 7,乙醇体积分数60%,乙醇洗脱用量8倍柱体积。验证试验显示,按最优工艺纯化后的草果总黄酮含量由纯化前的22.556 7 mg/g上升至57.728 2 mg/g,纯化倍数为2.56(n=3)。结论:所建含量测定方法灵敏度高、稳定性好,优化的纯化工艺稳定、可行,可用于草果总黄酮的纯化。