芹菜素影响非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的RAD51基因调控机制研究

摘要

cqvip:目的:从RAD51基因途径研究芹菜素对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:取人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP,分为对照组(空白培养基)、顺铂组(5 g/L)和芹菜素低、高剂量组(10、20μmol/L),采用MTT法检测A549/DDP细胞生长,采用AnnexinⅤ/PI双染色法结合流式细胞术检测其凋亡情况。取A549/DDP细胞,分为顺铂单用组(1、2、4、8、16μg/mL)和芹菜素联用组(10μmol/L,在顺铂基础上加用),采用MTT法测定并计算细胞增殖抑制率;采用回归分析模型计算药物的半数抑制浓度(IC50),并以此计算芹菜素的逆转指数。将18只裸鼠随机分为对照组、顺铂单用组和芹菜素联用组,每组6只,接种A549/DDP细胞使形成移植瘤后,分别腹腔注射生理盐水、顺铂(2 mg/kg,隔天给药1次)、顺铂(剂量、用法同前)+芹菜素药液(30 mg/kg,每天给药1次),连续给药18 d,测量小鼠的体质量和移植瘤质量并计算抑瘤率。取人肺癌细胞A549和A549/DDP,分为正常组(A549细胞)、对照组(A549/DDP细胞)、顺铂组(5 g/L,A549/DDP细胞)和芹菜素低、高剂量组(10、20μmol/L,A549/DDP细胞),分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测细胞中RAD51的mRNA及其蛋白表达情况。结果:与对照组比较,芹菜素低、高剂量组细胞增长数均显著降低,凋亡率均显著升高且显著高于顺铂组(P<0.05或P<0.01)。联用芹菜素后,A549/DDP细胞的增殖抑制率均较相应质量浓度的顺铂单用组显著升高(P<0.05);芹菜素联用组的IC50为(5.81±0.47)μg/mL,显著低于顺铂单用组的IC50(14.44±0.52)μg/mL(P<0.05);逆转指数为2.49。裸鼠抑瘤实验结果显示,联用芹菜素后,A549/DDP荷瘤裸鼠抑瘤率为68.72%,显著低于顺铂单用组的33.82%(P<0.05)。与正常组A549细胞比较,对照组A549/DDP细胞中RAD51mRNA及其蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05);与对照组A549/DDP细胞比较,芹菜素低、高剂量组A549/DDP细胞中RAD51 m RNA及其蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05);与顺铂组A549/DDP细胞比较,芹菜素低、高剂量组A549/DDP细胞中RAD51 m RNA及其蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论:芹菜素能够有效逆转人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的耐药性,其机制可能与下调RAD51基因转录及其蛋白表达有关。